華雅思創(chuàng)生物推出一波分子產(chǎn)品，電泳是分子最基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)，今天華雅思創(chuàng)先和大家聊聊如何得到一張漂亮的電泳圖。

“工欲善其事，必先利其器”，能否做一塊好的瓊脂糖凝膠，直接影響到后面電泳和結(jié)果的分析。制膠前，給大家的建議：

1.?在制膠時(shí)必須將制膠模具、梳子以及燒杯等物品洗凈，以免干膠及其他雜質(zhì)帶入；

2.?在溶膠時(shí)應(yīng)觀察溶液中是否有未溶解的瓊脂糖顆粒，確保溶膠完全；

3.?在溶液倒入制膠模具前必須充分混勻，以免制出來的膠出現(xiàn)不均勻的現(xiàn)象。

圖一：制膠時(shí)帶入了其它雜質(zhì)，形成了障礙物，使得DNA條帶電泳時(shí)受到阻礙無法繼續(xù)電泳，從而形成扭曲帶

圖二：制膠時(shí)溶膠不完全以致瓊脂糖顆粒殘留，形成一些濃度較高的凝膠區(qū)域，在DNA電泳經(jīng)過這些區(qū)域時(shí)，部分DNA被阻礙在這里而形成不規(guī)則亮帶。

凝膠的濃度是常被忽略問題。建議：長(zhǎng)片段的DNA選用低濃度的凝膠電泳，短片段的DNA則選用高濃度的凝膠電泳。

表一：分離不同大小的DNA片段所用的最適凝膠濃度

要想電泳跑出可見條帶的話，至少需要上樣50 ng，但是0.5 cm寬的梳子最好不超過0.5μg的DNA量，因?yàn)樯蠘恿窟^多會(huì)造成加樣孔超載，從而導(dǎo)致拖尾或彌散，對(duì)于較長(zhǎng)的DNA此現(xiàn)象更為明顯。另外，加樣量的多少還應(yīng)依據(jù)加樣孔的大小及DNA片段的長(zhǎng)度而定，當(dāng)加樣孔大時(shí)，樣品上樣量應(yīng)相應(yīng)加大。

通常情況下電壓越低，走出的電泳條帶越平整。低電壓電泳時(shí)，電泳緩沖液也不容易發(fā)燙，也能確保在電泳的過程中凝膠不會(huì)變形。當(dāng)然電壓太低，等待電泳結(jié)果的時(shí)間就會(huì)延長(zhǎng)，綜合考慮，一般控制電泳電壓≤5V/cm，即可保證電泳條帶的清晰度。

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圖三和圖四同一樣本跑出的圖，但是出來的效果差別非常大，主要是因?yàn)殡娪緯r(shí)的電壓不同

圖三由于電泳的電壓過大，導(dǎo)致電泳條帶都扭曲變形了。

一些片段的DNA，電泳20-30min家常便飯，有的甚至需要更長(zhǎng)的時(shí)間，如果想稍微快一點(diǎn)，可以選用濃度比較稀的凝膠或稍微調(diào)高一點(diǎn)電壓進(jìn)行電泳。

產(chǎn)品名稱：SeaKem? Gold瓊脂糖粉

產(chǎn)品貨號(hào)：50150

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性能

??高凝膠強(qiáng)度；

???低EEO（電滲）≤0.05

??脈沖場(chǎng)凝膠電泳中可分離DNA?50kb-10Mb

??垂直電泳中可快速分離DNA?30kb-50kb

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?關(guān)于這些參數(shù)的內(nèi)涵：?

1.?凝膠強(qiáng)度：衡量瓊脂糖性能的關(guān)鍵參數(shù)，凝膠強(qiáng)度越高，凝膠性能越好，可以保證在低濃度下，凝膠性能依然很好，高凝膠強(qiáng)度瓊脂糖適合大分子核酸。Seakem?Gold?Agarose?凝膠強(qiáng)度高，可在0.3%、0.5%的濃度下分離超大片段核酸。

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2.?低電滲（Low?EEO）：電滲是一種物理現(xiàn)象，由于瓊脂糖這樣的多孔支持物在電場(chǎng)中會(huì)吸附水中的正負(fù)離子，而使溶液帶電向電極泳動(dòng)，從而干擾核酸或蛋白電泳，?Lonza??Seakem ?Gold ?Agarose金瓊脂糖是低電滲≤0.05，幾乎不干擾核酸電泳。

?應(yīng)用：

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??分析長(zhǎng)片段?PCR?產(chǎn)物?

??分離和進(jìn)一步操作?DNA?>1,000?bp?

??DNA?& RNA?的分析電泳

??DNA & RNA?印跡? ?

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